مبانی و روندهای عملی Real-Time PCR و وسترن بلات برای سنجش بیان ژن

مبانی و روندهای عملی Real-Time PCR و وسترن بلات برای سنجش بیان ژن

کتاب های مرتبط 

مبانی Real Time PCR وسترن بلات
مولفان و گرد آورندگان: دکتر عبدالله اردبیلی، دکتر سید محمد هادی رضوی نیکو، حسین واضح، سحر اردلان

زیر نظر:‌دکتر علیجان تبرائی،‌دکتر عزت الله قائمی

انتشارات : اطمینان

سال انتشار : ۱۳۹۸

نوبت چاپ : اول

زبان کتاب : فارسی

شابک کتاب :۹۷۸۶۲۲۶۰۳۰۸۵۶

نوع چاپ : تک رنگ

جلد کتاب : شومیز

قطع : وزیری

تعداد صفحات : ۹۲ صفحه

مبانی Real Time PCR

مراحل وسترن بلاتینگ

این روش آزمایشگاهی دارای ۳ مرحله است: اول انتقال به ژل الکتروفورز دوم انتقال به غشاء نیتروسلولز و سوم شناسایی پروتئین اختصاصی. ابتدا پروتئین‌های تفکیک شده بر روی ژل الکتروفورز به غشاء منتقل می‌شود. سپس از پادتنها (آنتی‌بادی‌ها) برای مشخص کردن پروتئین‌ها استفاده می‌شود. برخلاف روش، روش وسترن بلات یک روش غیر مستقیم جستجوی پادگن است.

تشخیص با آنتی‌بادی

پس از بلاتینگ پروتئین‌ها و بلوکه کردن غشا، مرحله تشخیص اختصاصی را می‌توان انجام داد. همانگونه که قبلاً نیز گفته شد ایمونوبلاتینگ در بسیاری از موارد به هدف تشخیص طبی است. در این موارد باندهای انتقال یافته شامل همه یا بخشی از پروتئین‌های پیکره میکروب (باکتری، ویروس یا قارچ) است که وجود یا عدم وجود آنتی‌بادی ضد سرم آن‌ها در سرم انسان یا حیوان بررسی می‌گردد.

مواد

بافر تریس نمکی با PH 7.5 (TBS). این بافر شامل تریس ۲۰ میلی مولار و کلرید سدیم ۱۵/۰ مولار است.

بافر تریس نمکی حاوری توین ۰۵/۰ درصد (TBS-T). به هر لیتر از بافر تریس نمکی ۵/۰ میلی لیتر توین- ۲۰ اضافه شود.

آنتی‌بادی اولیه (سرم بیمار یا حیوان ایمن شده). در صورت لزوم با TBS-T رقیق می‌گردد.

آنتی‌بادی ثانویه. این آنتی‌بادی ضد بخش ثابت آنتی‌بادی اول است و با آنزیم (پراکسیداز) کونژوگه شده‌است. رقت مورد نیاز از این آنتی‌بادی در TBS-T تهیه می‌شود.

محلول سوبسترای آنزیم پراکسیداز شامل دی آمینو بنزیدین ۵/۰ میلی‌گرم در میلی لیتر و پراکسید هیدروژن ۱/۰ درصد در TBS است.